Khởi đầu sự nghiệp anh hùng của mình, Người Nhện đánh bại hàng loạt kẻ xấu như Tinkerer; thợ săn Kraven - kẻ muốn đi săn Người Nhện; Sandman - tên tội phạm có khả năng biến thành cát; Dr. Doom (Tiến sĩ hủy diệt); Lizard - một nhà khoa học tài năng biến thành một loài bò sát khổng lồ; Living Brain - một cỗ máy hóa điên; Electro - một thợ điện sau một tai nạn đã trở thành một nguồn điện sống; tên trùm tội phạm Big Man và nhóm Enforcers, Mysterio - một kẻ gây ảo giác khiến Người Nhện bị coi là tội phạm; Green Goblin (Yêu tinh xanh) - một tên tội phạm điên cuồng muốn thống trị thế giới ngầm; và cả kẻ thù đáng sợ nhất từ trước tới nay: Dr. Octopus (Tiến sĩ bạch tuộc) một nhà khoa học có thêm 4 cánh tay thép gắn sau lưng... Một vài tên trong số tội phạm nêu trên đã lập ra nhóm Sinister Six, hoạt động dưới sự lãnh đạo của chính Octavius.

Trước khi tốt nghiệp trung học, Peter tiếp tục đánh bại nhiều kẻ phá hoại khác như Circus of Crime, Scorpion, Beetle, Spider-Slayer, Crime-Master và cả Molten Man.

Peter còn đối đầu với nhiều kẻ địch mới như Rhino - một tên tội phạm mang bộ giáp bất khả xâm phạm có ý định bắt cóc John Jameson; Shocker với đôi găng tay điện chết người Venom là sinh vật không có chủ, kẻ thù có sức mạnh tương đương và giống người nhện... Peter cũng đã gặp gỡ và hẹn hò với Mary Jane, mặc dù thời gian này anh có nhiều cảm tình với Gwen Stacy hơn. Nhiều tuần sau sự trở lại của tên Kraven "thợ săn" và chiến đấu Vulture, Peter bắt đầu tự hỏi liệu anh có nên từ bỏ thân phận Người Nhện của mình không? Nhưng rồi số vụ tội phạm lại tăng cao, còn xuất hiện thêm một tên Kingpin bắt cóc J.J. Jameson, vì thế Peter buộc phải tiếp tục thực thi công lý, đồng thời anh cũng nhớ lại lý do vì sao trước kia anh đón nhận sứ mệnh cao cả này.